应用徕卡激光扫描共聚焦显微镜观察多种生物活性物质对门细胞内钙的影响

应用观察多种生物活性物质对门细胞内钙的影响

细胞内离于钙浓度的变化是钙信号作为细胞通讯第二信使的物质基础，因而测定静止态和激活态细胞中离子钙浓度十分重要。过去，人们采用生物发光蛋白、金属馅指示剂、ca’选择性微电极等方法只能采用微注射方法观察少数大型细胞的离子钙。80年代以来，随着ca2’特异荧光指示剂和显微荧光光度计的联合应用，人们才开始通过对细胞无刨性纳（：az’测定方法研究ca”信号。直到zui近几年，徕卡激光扫描共聚焦显微镜的应用大大加速了人们对单个细胞离子钙及其亚细胞区域分布的研究。应用徕卡激光扫描共聚焦显微镜和ca”特异的荧光指示剂f1Mo—3，可观察多种生物活性物质对1。I工—PN细胞离子钙的影响。I上c—PKl细胞是来源十猪肾小管1：皮的细胞系，已得到学术界的*。它与近端小管上皮细胞有一些相同的转运功能，而其对刺激的反应却与亨氏拌升支粗段相似。因此，人们常用N上PRl细胞代替近端小管上皮细胞研究物质的转运，而代替亨氏拌升文物段上皮细胞研究其对激素的反应。上也有人应用I‘I‘c—PKl细胞研究肾小管上皮细胞的细胞内钙信使。u，c—PKl细胞在20mm以内特与外界交换50％的细胞总钙，剩余的细胞钙与外界交换较侵，称为侵交换钙池。在细胞核、高尔基器以及胞浆的其它区域，均包括快交换钙池和慢交换钙他两部分。

用*加压素（AvP），在富钙环境中培养的I，I，c—PKl细胞如果不受外界刺激，其细胞核和细胞质的离子钙浓度是一样的；受到AvP、ATP或EIrF刺激后，细胞总离于钙过性增高刷巳细胞核离子钙升高较细胞质离子钙升高更为突出。然而，在无钙的条件r培养儿I‘cPxl细胞受刺激后虽然仍出现一过性的总离子钙升高，但细胞核和细胞质离子钙升高的幅度差别不大。在徕卡激光共聚焦显微镜进一步研究发现，无论在无钙还是富钙的环境中，而用AVP预处理后，再用人TP刺激N。C—PKl细胞所引起的离子钙变化总不如未用AvP处理时。不同生物活性物质的受体类型不同，它们和1用的磷酸脂酶c同工酶也不同，从而导致不同钙库的动员。

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