高效液相色谱仪的原理和常见问题简述
【仪器网 使用手册】高效液相色谱仪主要用于分析高沸点不易挥发的、受热不稳定的和分子量较大的有机化合物。该仪器主要由溶剂输送系统、进样系统、分离系统(色谱柱)、检测系统和数据处理与记录系统组成，广泛应用于生命科学、食品科学、药物研究及环境研究等领域。
工作原理：
储液器中的流动相被高压泵打入检测系统，样品溶液经过进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内，由于样本溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的“吸附-解吸”的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时样本浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式输出检测结果。
使用时的常见问题：
1、涡流扩散
如果柱装填不均匀，流动相的速度就快；有的部位结块或装直紧密则流动速度就慢，多条流路有快有慢就会使区带变宽。因此固相载体的颗粒要小而均匀，装柱要松紧均一，涡流扩散小，柱效率高。
2、分子扩散
分子扩散就是物质分子由浓度高的区域向浓度低的区域运动，也称纵向分子扩散。若要减少分子扩散就要采用小而均匀的固相颗粒装柱。同时在操作时，如果流速太慢被分离物质停留时间长，则扩散严重。
3、质量转移
被分离物质要在流动相与固定相中平衡，这样才能形成较窄的区带。液相色谱中，溶质分子要在两个液相之间进行分配或在固相上被吸附和解吸附均需要一定的时间。流速快时，转移速度慢，来不及达到平衡动相就会移动，这种物质的非平衡移动会使区带变宽。
4、动相流速
当流速太低时，分子扩散严重，特别是在气相色谱中尤为突出。如果将理论塔板高度对流速作图，理论塔板高度随流速增加而快速下降，达到低值时，流速再加大则质量转移起主要作用，理论塔板高度又加大。在高效液相色谱中，流速稍快影响不大，但在凝胶过滤色谱中，因为物质要渗透到凝胶内部，所以质量转移影响大，流速加大会降低柱效率。
5、固定相颗粒大小
固定相颗粒越小柱效率越高，对流动相流动的阻力越大，需要加大压力才能使它流动。
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