小鼠B细胞杂交瘤细胞W632细胞35.1型号

小鼠B细胞杂交瘤细胞W632细胞35.1型号细胞特征：每周换液两三次。细胞应当在融合前传代。
质量控制：本细胞经过了检测，不含有细菌、真菌、病毒（HIV、HBV、HCV）、支原体。

小鼠B细胞杂交瘤细胞W632细胞35.1型号ATCC上皮细胞样贴壁生长

 DMEM-H: Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  胎牛血清，10%消化3-5分钟。1:3。3天内可长满。*培养基+8%DMSO公司细胞的简洁信息：

（1）储存：液氮。

（2）运输：干冰。

（3）用途：只可用于科研。

（4）第二代培养末期液氮冻存。

（5）小鼠B细胞杂交瘤细胞W632细胞35.1型号ATCC每冻存管细胞数：>5×105 cells/1ml。

（6）不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

收到小鼠B细胞杂交瘤细胞W632细胞35.1型号ATCC后的处理：

1）收到细胞后，首先观察瓶身是否完好（注意有无缝隙，裂痕）。

2）显微镜下观察细胞的生长状况，有无细胞漂浮。

3）用新洁尔灭消毒瓶口及瓶身。

4）打开瓶口，再次用新洁尔灭消毒瓶口（可能会有液体溢出，注意不要碰到液体），酒精灯烤瓶口消毒。

5）将培养液转移至50ml离心管或广口瓶中（若细胞漂浮严重，离心培养基，1000g*5分钟，将离心后的培养基转移至另一个大离心管中，留一点吹打细胞沉淀成悬液，回收细胞至原培养瓶），若漂浮不严重，亦离心一下。

6）在原培养瓶中留一部分原装培养液，再补加自己新配的培养基至适当容积，例如4ml，让细胞适应一下环境。  当细胞长到70-80%，冻存大部分，小部分传代。

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0945-400ML    饱和酚 (pH 6.6/7.9)    生物技术级    400ML    N/A    2 years    PHENOL, SATURATED (pH 6.6/7.9)
0954-100MG    *    美国药典级    100MG    59-05-2    1 year    METHOTREXATE
0961-100ML    蚁酸(甲酸)    高纯级    100ML    64-18-6    4 years    FORMIC ACID
0961-500ML    蚁酸(甲酸)    高纯级    500ML    64-18-6    4 years    FORMIC ACID
0966-100ML    酚:氯仿:异丙醇 25:24:1(pH 5.2)    生物技术级    100ML    N/A    2 years    PHENOL:CHLOROFORM, LOW pH
0966-400ML    酚:氯仿:异丙醇 25:24:1(pH 5.2)    生物技术级    400ML    N/A    2 years    PHENOL:CHLOROFORM, LOW pH
0973-100ML    杂交混合物,50%甲酰胺        100ML    N/A    1 year    HYBRIDIZATION COCKTAIL, 50% FORMAMIDE
0973-50ML    杂交混合物,50%甲酰胺        50ML    N/A    1 year    HYBRIDIZATION COCKTAIL, 50% FORMAMIDE
0975-25G    尿苷    超纯级    25G    58-96-8    4 years    URIDINE
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0990-100MG分装    盐酸*    美国药典级                VANCOMYCIN HYDROCHLORIDE
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产品名称：小鼠B细胞杂交瘤细胞W632细胞35.1型号ATCC

细胞术检测样品制备方法

A.小鼠B细胞杂交瘤细胞W632细胞35.1型号ATCC直接标记抗体(FITC标记抗体)：

(1) 收集1×106个细胞，800rpm离心5min，4℃以上冷PBS洗一次。

(2) 用4%多聚甲醛1ml室温固定40分钟，800rpm离心5min去上清。加2ml PBS重悬洗涤细胞，800rpm离心5min。

(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重悬细胞，冰上孵育10min，800rpm离心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和饱和剂量的荧光标记抗体(5×105个细胞/20ul抗体)的PBS ,避光冰上放置30min,离心弃上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定，待测即可。

(4) 用流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。^[2]

B. 未标记抗体间接免疫荧光标记法：

(1)收集2×106个细胞，用冷的PBS 2ml 洗涤细胞一次，800rpm离心5min。

(2)用2ml 4%多聚甲醛室温固定细胞40min,800rpm离心5min；2ml PBS重悬细胞，800rpm离心5min；

(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重悬细胞，冰上放置10min,800rpm离心5min。

(4)加入饱和剂量未标记抗体，冰上放置40min,800rpm离心5min，用2ml冷的PBS 重悬细胞，800rpm离心5min，洗去未结合一抗，重复一次。

(5)加入荧光标记(FITC)标记的二抗，冰上避光放置40min后，800rpm离心5min，去上清，PBS洗涤两次。

(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重悬细胞；固定待测。

(7)流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。

C.细胞周期、细胞凋亡及DNA倍体分析样品(PI染色)的制备：

(1)待测样本制成单细胞悬液，然后200g离心5分钟，弃上清。

(2)用4℃预冷的70%冷乙醇固定，4℃保存 ，至少固定18小时。

(3)调整细胞浓度为106细胞/毫升，取1毫升细胞悬液，用PBS洗三次，细胞重悬于1毫升PI染液中，37℃孵育30分钟即可进行流式分析。

(4)PI染液终浓度为50微克/毫升，RNase A终浓度为20微克/毫升。